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研域生物公司: 研究牛血清是細胞培養(yǎng)的實驗原理
發(fā)布時間： 2017-08-16 點擊次數(shù)： 1663次牛血清是細胞培養(yǎng)基中的中藥成份之一。在培養(yǎng)基中加入適量血清（10%），首先可以補充細胞生長所需的生長因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性；再次，它還能中止胰酶的作用，并保護細胞免受機械損傷等。但是血清成分復雜，不同來源、不同批號生產(chǎn)的血清對細胞生長作用的差異較大。血清的保存期只有一年，不同存放時期的血清的效力也不同。所以，當新購得的血清或要在開始一個重大試驗的時候，應(yīng)首先進行牛血清的篩選。 篩選時，通常選用正常的二倍體細胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細胞，也可以使正要準備培養(yǎng)的細胞。另外，用已知血清作對照。
儀器、材料和試劑
儀器
CO2 培養(yǎng)箱，超凈工作臺，微量加樣器，滅菌鍋
材料
96孔培養(yǎng)板，刻度吸管，移液管，試管，吸管，廢液缸，血球計數(shù)板，HeLa細胞，Mel細胞
試劑
DMEM，不同批號的血清，胰酶，雙抗
實驗步驟
1.取HeLa細胞和Mel細胞（本來應(yīng)該取正常的二倍體細胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細胞，但是實驗室條件有限，本組做HeLa細胞），胰酶消化后，用無血清培養(yǎng)基（事先加雙抗）吹打成細胞懸液（避免以前血清的干擾）。計數(shù)。
2.取4000個左右的HeLa細胞加入到每行的*孔（在加之前要震蕩培養(yǎng)基）。本實驗經(jīng)計數(shù)后應(yīng)加11μL細胞。
3.在A和H行中*孔加入89μL含標準血清（2004.12）的培養(yǎng)基。（對照組）
4.在A和H行中每一孔中加入100μL含標準血清的培養(yǎng)基。
5.將*孔中的液體吸100μL至第二孔，從第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。zui后的100μL棄掉。這樣就形成了從*個孔到zui后一個孔的細胞梯度從大約2056，1028等至1個。（要吹細均勻）
6.每個孔再補加100μL含標準血清的培養(yǎng)基。這可以保證孔中的營養(yǎng)物質(zhì)。
7.在B行采取同樣的方法。白介素ELISA試劑盒不同的是用含有需篩選的批號為011217血清代替標準血清。
8.在C至G行采用同樣的方法。血清批號分別是030224，040528，040830，041012，041016。
9.將96孔培養(yǎng)板放入CO2 培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)一周。
10. 培養(yǎng)結(jié)束后，觀察細胞生長的情況。比較在同一細胞濃度下的不同學清對細胞生長的影響。在同一細胞濃度下細胞生長數(shù)zui多的培養(yǎng)基所含有的血清即可作為被選擇的血清樣品。
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