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技術(shù)文章ARTICLE
關(guān)于ELISA試劑盒試驗(yàn)及應(yīng)用免疫檢測(cè)技術(shù)原理
發(fā)布時(shí)間： 2018-01-26 點(diǎn)擊次數(shù)： 1841次ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法定量測(cè)定三聚氰胺殘留。將標(biāo)準(zhǔn)、樣品提取物和三聚氰胺酶標(biāo)記物添加到現(xiàn)已包被有三聚氰胺抗體的微孔中開(kāi)始反應(yīng)。在30分鐘的培養(yǎng)過(guò)程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，培養(yǎng)30分鐘后洗掉微孔中所有沒(méi)有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。在用稀釋的洗液清潔完畢后，每孔中添加清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。培養(yǎng)20分鐘后中止此反應(yīng)，根據(jù)各孔色彩深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的色彩得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。
ELISA試劑盒酶我們現(xiàn)已對(duì)能夠呈現(xiàn)在檢測(cè)樣品中的許多有機(jī)和無(wú)機(jī)物做了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)它們不與這個(gè)試劑盒產(chǎn)生交叉反應(yīng)。然而在樣品中也含有一些容易變質(zhì)的化合物，它們通過(guò)基質(zhì)影響來(lái)攪擾測(cè)定，如含脂肪的食物，它們?cè)跍y(cè)定前要經(jīng)過(guò)稀釋來(lái)消除一些基質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。在運(yùn)用的過(guò)程中呈現(xiàn)失誤也會(huì)影響成果，例如試劑盒存儲(chǔ)的條件、汲取液體的程序、汲取液體的不、在產(chǎn)生免疫和底物反應(yīng)的過(guò)程中培養(yǎng)時(shí)間不。
ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù)
（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
（2）加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)問(wèn)，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
（3）加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成正相關(guān)。
（4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。
根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固醫(yī)學(xué)教丨育網(wǎng)整理相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物，即可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。
用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。
將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)
合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液。
ELISA試劑盒酶在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。