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洗滌是決定實驗成敗的關(guān)鍵
發(fā)布時間： 2023-07-25 點擊次數(shù)： 1617次ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)是目前臨床上常用的免疫學(xué)檢驗方法,由于其試劑穩(wěn)定,易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀,既適宜于大規(guī)模篩查試驗,又可用于少量標(biāo)本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析,目前已廣泛用于微生物學(xué),寄生蟲學(xué),腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子檢測等領(lǐng)域.EUSA有敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的特點,但其同時存在影響因素多的不足,現(xiàn)就實驗操作中常見的影響因素進(jìn)行分析實驗,以提高ELASA的實驗質(zhì)量.
洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)聚，但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯待塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。因此在 ELISA 測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。在標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯（吐溫，Tween）一類物質(zhì)即右達(dá)到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質(zhì)，常作為助溶劑。根據(jù)脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號，結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯20，在ELISA中為常用。它的洗滌效果好，并具有減少非特異性吸附和增強(qiáng)抗原抗體結(jié)合的作用。
洗滌如不成功，特別在后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。
ELISA板的洗滌一般可采用以下方法:
①吸干孔內(nèi)反應(yīng)液。
②將洗滌液注滿板孔。
③放置2 min，略作搖動。
④吸干孔內(nèi)液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為3~4次，有時甚至需洗5~6次。