服務(wù)熱線
021-54479081
021-54461587
-
ELISA試劑盒的必要條件
發(fā)布時(shí)間： 2017-12-25 點(diǎn)擊次數(shù)： 1552次一.ELISA試劑盒的試劑，超卓的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測效果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的構(gòu)成不同而有所差異，國內(nèi)醫(yī)學(xué)查驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。本文將敘說板式ELISA各個(gè)操作進(jìn)程的留心要害，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特別儀器協(xié)作運(yùn)用，嚴(yán)峻遵照規(guī)矩操作，必能得出準(zhǔn)確的效果。
二.可用作ELISA試劑盒的標(biāo)本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測定其間某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清、尿液)，有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均對等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只需待血清天然凝聚、縮短后即可取得。除特別狀況外，在醫(yī)學(xué)查驗(yàn)中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可對等運(yùn)用。
三. ELISA試劑盒血清標(biāo)本可按常規(guī)辦法搜集，應(yīng)留心避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會添加非特異性顯色。
四.血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其間的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。
五.一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，逾越一周測定的需低溫冰存。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)部分濃縮，散布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上劇烈振動。混濁或有沉積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。重復(fù)凍融會使抗體效價(jià)下跌，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測，宜少數(shù)分裝冰存。保存血清自搜集時(shí)就應(yīng)留心無菌操作，也可參與恰當(dāng)防腐劑。
六.按試劑盒說明書的要求預(yù)備試驗(yàn)中需用的試劑。ELISA試劑盒頂用的蒸餾水或去離子水，包含用于洗刷的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液運(yùn)用pH計(jì)丈量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運(yùn)用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
七.在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留心不可濺起，不可發(fā)生氣泡。
八.ELISA試劑盒加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)矩的量參與板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以發(fā)生穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按規(guī)矩的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參與稀釋液，再在其參與血清標(biāo)本，然后在微型顫抖器上顫抖1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物運(yùn)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液進(jìn)程靈敏結(jié)束