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PCR在臨床中的應用（三）
發(fā)布時間： 2009-08-03 點擊次數(shù)： 3384次對于梅毒（TP）的診斷：敏感性、特異性均高。一般用來做確證試驗。不能用于觀察療效：即使患者經(jīng)過足夠的抗梅治療，血清學反應仍可保持陽性，甚至保持終生。
目的探討聚合酶鏈反應（PCR）反向膜雜交技術(shù)檢測臨床標本中結(jié)核分支桿菌（TB）DNA的價值.方法用PCR反向膜雜交技術(shù)檢測522例結(jié)核及60例非結(jié)核患者臨床標本中的TBDNA,同時用培養(yǎng)、抗酸染色涂片及常規(guī)PCR法作對照.結(jié)果PCR反向膜雜交法陽性率為80.6%（411/690）,培養(yǎng)為18.1%（125/690）,鏡檢為13.9%（96/690）,常規(guī)PCR為59.6%（411/690）,PCR反向膜雜交法與常規(guī)法比較（P＜0.001＝,差異有顯著意義.PCR反向膜雜交法陽性檢出率高于常規(guī)PCR（P＞0.05）,但差異無顯著意義;該技術(shù)假陽性為零.結(jié)論PCR反向膜雜交技術(shù)檢測臨床標本中TB-DNA具有快速、高度特異性和敏感性,可為結(jié)核病的臨床早期診斷提供一種新的病原學診斷手段.
近年來聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)已經(jīng)用于Hp的診斷，該技術(shù)的敏感性比寡核苷酸探針增加了100倍，可以檢出少至100個Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已經(jīng)測出，為PCR特異性引物的選擇提供了依據(jù)。我們以一對與16SrRNA基因互補的寡核苷酸為引物（CP1/CP2），建立了從胃粘膜活組織標本中檢測Hp感染的PCR技術(shù)。用該方法檢測Hp標準菌株NCTC 11637，NCTC11848及50株從臨床病人胃粘膜活組織中分離的Hp菌株均產(chǎn)生450bp的片段，其敏感性為0.1pg的HpDNA，相當于100個細菌細胞 ，而對12株非Hp菌株（包括金葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌及空腸彎曲菌NCTC11351）以及無Hp感染的人胃粘膜細胞呈陰性反應。我們還用PCR檢測了96例因上消化道癥狀而行胃鏡檢查的患者，結(jié)果表明PCR檢查的Hp陽性率高于常規(guī)檢查法。我們還對17例經(jīng)不同方案治療后用常規(guī)方法檢查（尿素酶試驗、銀染、及培養(yǎng)均陰性）而被認為Hp被*的病人，用PCR檢查發(fā)現(xiàn)4例Hp陽性。以往我們對一些常規(guī)方法未能檢出而實際上還存在Hp的病人，誤認為Hp被*而放棄治療，這些病人短期內(nèi)Hp再現(xiàn)實際上是治療不*，這對于指導Hp感染的治療有十分重要的臨床意義。
HCMV感染是器官移植受者術(shù)后常見并發(fā)癥之一。HCMV感染系全身感染，臨床表現(xiàn)多樣，與移植排斥反應的臨床癥狀十分相似，易于混淆，但二者的產(chǎn)生條件截然相反，在治療上*不同。要弄清器官移植術(shù)后受者的臨床癥狀是否由HCMV感染所致，及時診斷活動性HCMV感染非常重要。HCMV感染是影響器官或組織移植成敗的重要因素。特別在骨髓移植感染中，如不及時診治，?？梢鹬旅ｋU和移植失敗。因此早期診斷和及時有效的預防性治療是降低移植術(shù)后HCMV病發(fā)生率和死亡率的關(guān)鍵。熒光定量PCR技術(shù)對HCMV DNA的檢測對感染的檢測具有臨床應用價值，因為體液中病毒DNA先于病毒感染的臨床癥狀或血清學證據(jù)的出現(xiàn)，可作為HCMV感染的早期指標，對于HCMV感染疾病的治療和預防具有重要的意義。由于HCMV可通過胎盤內(nèi)感染、產(chǎn)道感染等途徑傳播，而且受感染的新生兒死亡率較高，因此利用PCR進行早期診斷及采取及時的治療措施，對優(yōu)生優(yōu)育也有重要意義。目前對HCMV感染疾病的治療和預防主要采用抗病毒藥物。顯然對抗病毒藥物的療效需要有有效的觀察和評價手段。熒光定量PCR對HCMV DNA可進行定量分析，檢測指標穩(wěn)定，通過對DNA血癥水平的動態(tài)觀察以監(jiān)測HCMV疾病的發(fā)生、發(fā)展及預后，及時調(diào)整免疫抑制劑的用量，指導抗病毒治療，觀察療效，分析是否有耐藥等，因此可作為評價各種抗病毒藥物療效的有力手段。
附錄：
PCR在臨床中的應用（二）
PCR在臨床中的運用（一）- 上一篇：合成新藥現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢
- 下一篇：細胞凍存方法
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